能通过水解ATP获得能量以解开双链DNA的一种酶。这种解链酶分解ATP的活性依DNA解链蛋白赖于单链DNA的存在。如果双链DNA中有单链末端或切口，则 DNA解链酶可以首先结合在这一部分，然后逐步向双链方向移动。复制时，大部分 DNA解旋酶可沿滞后模板的5'-〉3'方向并随着复制叉的前进而移动，只有个别解旋酶沿着3'-〉5'方向移动的。