磷酸化是将磷酸基团加在中间 代谢产物上或加在蛋白质（protein）上的过程。其中除去磷酸基团的酶称为磷酸酶。 蛋白质磷酸化可发生在许多种类的氨基酸（蛋白质的主要单位）上，其中以丝氨酸为多，接着是苏氨酸。

除了蛋白质以外，部分核苷酸，如 三磷酸腺苷（ATP）或 三磷酸鸟苷（GTP）的形成，也是经由 二磷酸腺苷和 二磷酸鸟苷的磷酸化而来，此过程称为氧化磷酸化。另外在许多糖类的生化反应中（如糖解作用），也有一些步骤存在 氧化磷酸化作用。